Имипенем*

ВВЕДЕНИЕ

Одна из глобальных проблем в лечении инфекционных заболеваний антибиотиками заключается
в выработке микроорганизмами резистентных линий штаммов, что ведет к тяжелым последствиям
для больных. Признанный и действенный подход к решению проблем резистентности – создание
и внедрение новых или структурно измененных аналогов известных антибиотиков .

Несмотря на давнюю историю и разработанность бета-лактамных антибиотиков этот класс
антибиотиков и сегодня представляет особый интерес для лечения бактериальных инфекций
[] и поиска новых хемотерапевтических агентов. Механизм действия бета-лактамов связан
с их способностью к ковалентному связыванию с ферментами, участвующими в построении
клеточной стенки бактерий, и образованию нежизнеспособных дефектных клеток, что, в
итоге, приводит к их гибели.

В ряду антибиотиков бета-лактамного ряда карбепенемы являются наиболее эффективными
низкотоксичными представителями широкого спектра действия. Ключевой структурой этих
соединений является 7-оксо-1-азабициклогепт-2-ен-2-карбоновая кислота, которая
и обусловливает их высокую устойчивость к бета-лактамазам []. Наличие 1R-гидроксиэтильной группы в положении С6 карбапенемов приводит к значительному усилению
антибактериальной активности, а также защищает бета-лактамное кольцо, обеспечивая
стабильность антибиотиков в отношении действия бета-лактамаз. Структуры некоторых
из используемых на практике карбепенемовых антибиотиков (рис. 1) с химической точки
зрения различаются только заместителем SR при С3, остальная часть молекул практически
одинакова.

Таблица 1.

In vitro-антибактериальная активность соединений (IIIа, б)–(VIа, б)

Микро-организмы	МПК (мкг/мл)
(IIIа)	(IIIб)	(IVа)	(IVб)	(Vа)	(Vб)	(VIа)	(VIб)	Меропенем	Цилапенем
E. coli	>0.5	0.5	0.015	2.0	0.015	>32.0	0.031	0.5	1.0	0.5
Ps. aeruginosa	0.031	0.5	0.031	0.5	0.031	2.0	0.031	4.0	2.0	>4
Str. oralis	0.015	0.125	0.031	1.0	0.031	0.125	0.015	0.125	1.0	4.0
C. albicans	0.5	0.5	0.015	0.5	0.015	0.25	0.031	0.125	1.0	4.0

Показанные на -метилкарбапенемы получены путем химического синтеза. К настоящему времени предложен
ряд синтетических подходов, получено значительное количество производных карбапенемов
и изучены их фармакологические свойства . Тем не менее, из-за проблем резистентности исследования по поиску новых антибиотиков
этого ряда и модифицированию известных актуальны по сей день. Структурно-ориентированный
анализ имеющегося массива известных препаратов карбепенемовых антибиотиков позволяет
оценить наиболее перспективные направления их модифицирования. Прежде всего, следует
отметить то, что ответственные за биоактивность бета-лактамный цикл и бициклическая
часть с боковым 6-(1-гидроксиэтильным) заместителем в структурно-ориентированных синтезах
остаются без изменений.

Способ применения и дозы

Все препараты, блокирующее синтез холестерина в организме, необходимо принимать только по вечерам. Это связано с тем что основная масса холестерина вырабатываемое организмом, производится именно в ночное время.

Дозировка препарата назначается только после предварительной диагностики врачом. Самостоятельный выбор дозировки может привести к тому, что количество холестерина в организме резко уменьшится, начнутся проблемы с различными жизненно важными системами организма.

При неправильно подобранной дозе возможно проявление симптомов, характерных для заболеваний печени, заболеваний желудочно-кишечного тракта, заболеваний сердечно-сосудистой системы.

Синтез и оценка анальгезирующей активности нового 5-бутил-1,2-дифенил-6-оксо-1,6-дигидропиримидин-4-олята натриястатья

Статья опубликована в журнале из списка RSCI Web of Science

Статья опубликована в журнале из перечня ВАК

Авторы:
Куваева Е.В.,

Колесник Д.А.,

Левшукова П.О.,

Ивкин Д.Ю.,

Яковлев И.П.
Журнал:
Вопросы биологической, медицинской и фармацевтической химии
Том:
24
Номер:
6
Год издания:
2021
Издательство:
Общество с ограниченной ответственностью Издательский дом Русский врач
Местоположение издательства:
Москва
Первая страница:
42
Последняя страница:
46
DOI:
10.29296/25877313-2021-06-06
Аннотация:
Цель работы. Синтез 5-бутил-1,2-дифенил-6-оксо-1,6-дигидропиримидин-4-олята натрия (исследуемое соединение, целевое соединение) и оценка его острой токсичности, а также анальгезирующей активности in siiico и in vivo. Материал и методы. Целевое соединение получено взаимодействием 5-бутил-6-гидрокси-2,3-дифенилпиримидин-4(3Н)-она и эквимолярным количеством водного раствора гидроксида натрия. Строение доказано с помощью ЯМР 1H и 13С спектроскопии. Прогнозирование острой токсичности исследуемого соединения осуществляли с помощью программного обеспечения GUSAR. Острую токсичность in vivo определяли на белых аутбредных мышах-самцах. Компьютерный скрининг биологической активности проводили с помощью программы PASS, расположенной на веб-сервисе и доступной через Интернет. Для экспериментальной оценки анальгезирующей активности были использованы две модели: «отдергивание хвоста от теплового излучения (tail-flick)» и «уксуснокислыекорчи». Результаты. Соединение 5-бутил-1,2-дифенил-6-оксо-1,6-дигидропиримидин-4-олят натрия синтезировано с количественным выходом. Прогнозируемые и экспериментальные данные острой токсичности позволяют отнести исследуемое соединение к классу «умеренно опасные». В процессе скрининга биологической активности получены данные о предположительном анальге-зирующем действии. Исследование анальгезирующей активности in vivo показало, что целевое соединение обладает выраженным анальгезирующим действием. Выводы. Синтезировано новое соединение 5-бутил-1,2-дифенил-6-оксо-1,6-дигидропиримидин-4-олят натрия. Его строение доказано с помощью современных физико-химических методов анализа. Результаты компьютерного моделирования позволили определить класс токсичности и потенциальную биологическую активность. С помощью экспериментальных фармакологических исследований доказано, что исследуемое соединение обладает низким уровнем токсичности и проявляет выраженную анальгезирующую активность.
Добавил в систему:
Левшукова Полина Олеговна

Свойства препарата

Имипенем циластатин проявляет эффективность при инфицировании многими микроорганизмами, в т. ч. устойчивыми к воздействию антибиотиков из групп аминогликозидов, цефалоспоринов, пенициллинов. Фармакологические свойства — антибактериальные, бактерицидные, противомикробные.

Активное вещество — производное тиенамицина. При попадании в организм оно подавляет процесс синтеза клеток патогенных бактерий. В спектр воздействия входит весь список микроорганизмов, имеющих клиническую значимость.

Второй компонент не проявляет антибактериальный эффект, а подавляет фермент, окисляющий имипенем. Это повышает количество активного вещества в почках. Биодоступность средства (способность к усвоению организмом) составляет 75-95%.

Лекарство выпускают в виде порошка, из которого необходимо готовить раствор. В 1 флаконе содержится по 500 мг каждого из 2-х основных компонентов. Торговое название средства – «Имипенем с циластатином».

Показания к назначению

В соответствии с инструкцией по применению Имипенем циластатин назначают при инфекционно-воспалительных болезнях.

Показаниями для капельниц (внутривенное ведение) являются тяжело протекающие инфекции:

Мочевыводящих путей;
Костной системы;
Кожных, подкожных тканей.

Капельницы назначают также при гинекологических, интраабдоминальных инфекциях, септицемии, эндокардите.

Показания для уколов – инфекционные болезни лёгкой, средней тяжести:

Кожных, подкожных тканей;
Гинекологические;
Интраабдоминальные.

Имипенем циластатин применяют и в период после операции для профилактики инфицирования.

Применение и показания

Согласно иснтрукции по применению имипенем рекомендуется для лечения серьезных инфекций у лошадей и мелких животных в том случае, когда другие менее дорогие антибиотики неэффективны или оказывают неприемлемые побочные эффекты.

Фармакокинетика и антибиотика имипенема, и блокатора антибиотикорезистенстности циластатина схожа. Они всасываются в ЖКТ в незначительном количестве, поэтому их вводят парентеральным путем. Биодоступность после в/м введения составляет примерно 95% для имипенема и 75% для циластатина. Имипенем согласно инструкции распределяется по всему организму, проникает через плаценту, выделяется с молоком, но в цереброспинальную жидкость не поступает. При введении вместе с циластатином выводится через почки и путем других механизмов. Приблизительно 75% от поступившей дозы экскретируется с мочой, около 25% другими путями, которые недостаточно хорошо изученны. Период полу- выведения у животных с нормальной функцией почек в среднем составляет 1-3 ч.

Хранение

Хранение, Устойчивость, Совместимость. Выпускаемый промышленностью стерильный порошок для инъекций антибиотика имипенема следует хранить при комнатной температуре (менее 30 °С). После разведения со 100 мл стерильного изотонического раствора устойчив в течение 10 ч при хранении в условиях комнатной температуры и в течение 48 ч при хранении в холодильнике. Время устойчивости препарата может уменьшаться, если используются другие растворители (см. листок-аннотацию). Растворы не следует замораживать. Производитель не рекомендует смешивать этот препарат с другими лекарственными средствами (по инструкции к применению).

После разведения стерильного порошка для инъекций с 1% раствором лидокаина гидрохлорида для инъекций полученную суспензию следует использовать в течение 1 ч.

Фармакологическое действие. Это комбинированное средство с фиксированным соотношением препаратов (антибиотика карбапенема (имипенема) и ингибитора дегидропептидазы I (DHPI) (циластатина)) обладает широким спектром активности. Полагают, что имипенем (группа антибиотиков карбапенемов) является бактерицидным препаратом, но в отношении некоторых бактерий может проявлять и статическое действие. Этот препарат обладает сродством к большинству пени- циллинсвязывающих белковых субъединиц и связывается с ними, тем самым подавляя синтез бактериальных клеточных стенок.

Имипенем согласно инструкции по применению проявляет активность в отношении большого количества бактерий, включая грамположительные аэробные кокки (также обладает некоторой бактериостатической активностью в отношении энтерококков), грамположительные аэробные бациллы (в т. ч. активен в отношении Listeria), грамотрицатель- ные аэробные бактерии (Haemophilus, Enterobacteriaceae, многие штаммы Pseudomonas aeruginosa) и анаэробов (в т. ч. некоторые штаммы Bacteroides).

Циластатин подавляет разрушение антибиотика имипенема посредством дегидропептидазы I в области щеточной каймы клеток канальцев почки. Это обеспечивает реализацию двух функций: создает высокий уровень препарата в моче и обеспечивает протективное действие в отношении клеток проксимального отдела почки, не допуская некроза канальцев, что может возникнуть, если применяют только имипенем.

Состав препарата

Имипенем назначается при наличии инфекциии и при воспалительных процессов

В составе препарата имеются следующие компоненты:

диоксид кремния;
пережелатинизированный крахмал;
моногидрат лимонной кислоты;
кукурузный крахмал;
стеарат магния;
небольшое количество целлюлозы;
аскорбиновая кислота.

Для того чтобы содержимое таблетки не окислялась предусмотрена оболочка. В составе оболочки имеются: титан железа, краситель оксида железа, макрогол.

Основной компонент препарата симвастатин. В составе данного активного вещества имеются такие элементы как: моногидрат лактозы, лимонная кислота, аскорбиновая кислота, целлюлоза, стеарат магния, диоксид кремния.

Противопоказания

Имипенем может спровоцировать возникновение заболеваний печени.

Применение препарата противопоказано в различных случаях:

При наличии высокой чувствительностью к компонентам препарата. Гиперчувствительность может проявиться в виде появления сыпи, раздражение или аллергической реакции. Не рекомендуется использовать препарат при наличии дефицита лактазы. Все препараты, в том числе и симло, использующиеся при лечении гиперхолестеринемии, воздействует не только на количество холестерина в крови, но и на непосредственно в выработке печенью холестерина. В связи с этим, использование препарата при различных заболеваниях печени, особенно связанных с самостоятельной выработкой липопротеидов, может быть опасно для жизни. Не рекомендуется употреблять препарат совместно с другими веществами превращающее окисление цитохрома

С осторожностью необходимо использовать препарат при беременности а также во время вскармливания. При использовании препарата необходимо учитывать возрастную группу, которая принадлежит пациент

Она должна быть от 18 лет. Использование любых препаратов влияющих на количество холестерина в возрасте менее 18 лет, может спровоцировать возникновение заболеваний печени.

Способ использования, дозы

Имипенем циластатин используют в виде капельниц или вводят внутримышечно. Если назначены капельницы, суточное количество для взрослых, детей от 12-ти лет составит 1-4 г. Капельницы делают каждые 6 ч. Детям от 3 мес., имеющим вес больше 4 кг, суточное количество рассчитывают, исходя из нормы 60 мг/1 кг.

Суточное количество для внутримышечного введения — 1-1,5 г. Эту дозу вводят в 2 приёма. Наибольшее допустимое количество при капельном введении для взрослых — 4 г./сут., для детей — 2 г./сут., при внутримышечных инъекциях — 1,5 г./сут. (для взрослых). Клинические исследования внутримышечного введения лекарства детям не проводились.

Терапию больных старше 65 лет проводят с осторожностью. С этой целью подбирают минимально допустимые дозы, проявляющие терапевтический эффект

В обязательном порядке выполняют контроль работы почек.

Продолжительность процедуры:

20-30 мин. для объёма раствора 250-500 мг;
40-60 мин. для объёма более 500 мг.

Если появилась тошнота, скорость капельницы уменьшают. Внутримышечные уколы делают в крупную мышцу (глубоко). После устранения проявлений болезни препарат используют ещё 2 дня.

Как сделать раствор для капельниц

Влейте во флакон с порошком растворитель (р-р декстрозы 5%-ный или 10%-ный, раствор NaCl 0,9%-ный и др.) в количестве 10-20 мл;
Энергично встряхните, чтобы получить суспензию;
Перенесите её в ёмкость с растворителем, должно получиться 100 мл объёма раствора;
Если на стенках флакона осталось немного лекарства, добавьте 20 мл раствора, полученного ранее, и энергично встряхните;
Объедините обе смеси и перемешайте.

Полученный раствор должен стать прозрачным. В 100 мл содержится 5 мг/мл активного вещества. Антибиотик, готовый к использованию, хранят при комнатной температуре (до 4 ч.) или в холодильнике (до 24 ч.).

Фармакодинамика и фармакокинетика

Имипенем угнетает процессы синтеза клеточных стенок бактерий. Вещество активно по отношению к аэробным

и анаэробным микроорганизмам

, однако никак не влияет на царство грибов. Антибиотик не могут расщепить бактериальные ферменты бета-лактамазы

, цефалоспориназы

и пенициллиназы

, поэтому он эффективен в тех случаях, когда другие препараты такого же рода бессильны.

Данное вещество оказывает влияние на стафилококки

, Listeria monocytogenes

, стрептококки групп B, С

и G

, Энетерококки

, Bacillus spp.

, Nocardia spp.

, зеленящие стрептококки

, которые относятся к группе Viridans

, Citrobacter spp.

, Аcinetobacter spp

. и некоторые устойчивые к действию штаммы.

Также к действию средства чувствительны грамположительные анаэробные бактерии — Eubacterium spp.

, Bifidobacterium spp.

, Peptococcus spp.

, Clostridium spp.

, Propionibacterium spp

. и грамотрицательные анаэробы — Bacteroides spp.

, Prevotella disiens

, Prevotella bivia

, Fusobacterium spp.

, Prevotella melaninogenica

, VeiIlonella spp.

Антибиотик никак не влияет на жизненный цикл микоплазм

, хламидий

, Enterococcus faecium

, Xanthomonas maltophilia

, грибы

, штаммы P. сepacia

, вирусы

, метициллин-резистентные стафилококки.

Внутривенные инъекции Имипенема позволяют достигнуть максимальной плазменной концентрации лекарства уже через 15-20 минут после введения. Препарат продолжает действовать в течение 5 часов после инфузии. При внутримышечных инъекциях биологическая доступность средства – порядка 95%, а период полувыведения – 60 минут. У препарата относительно низкая степень связывания с белками плазмы крови – до 20%.

Метаболизм вещества протекает в почках с помощью фермента дегидропептидазы

, который расщепляет бета-лактамное кольцо. Затем лекарство быстро и полностью распределяется по большинству тканей, органов и жидкостей (внутриглазная жидкость, стекловидное тело, мокрота, желчь, ликвор, миометрий, кожа и т.д.). Порядка 72% Имипенема, введенного внутривенно, выводится из организма в течение 10 часов.

Имипенем, инструкция по применению (Способ и дозировка)

Дозировка и способ введения зависят от тяжести заболевания, роста, веса и индивидуальных особенностей организма больного. Лекарство назначают внутривенно или внутримышечно, по рекомендации лечащего врача.

Внутривенные инфузии производят медленно, капельно. Чаще всего такой способ введения используют при начале сепсиса

, эндокардита

или других, угрожающих жизни инфекций, при физиологических нарушениях (например, шоке

).

Внутривенно, взрослым и детям старше 12 лет назначают по 1-4 грамма препарата в сутки. Инфузии производят каждые 6 часов. Для детей от 3 месяцев, которые весят более 4 кг, суточная дозировка рассчитывается из соображений 60 мг на один кг веса.

Внутримышечные инъекции назначают в возрасте от 12 лет. Лекарство вводят глубоко в мышцу по 1-1,5 грамма в сутки (за 2 приема).

Максимальная суточная дозировка для взрослых составляет 4 грамма внутривенно и 1,5 грамма внутримышечно. Детям в течение дня нельзя вводить более 2 грамм препарата в/в.

У пациентов, старше 65 лет, снижена функция почек, печени, нарушена работа сердечно-сосудистой системы

Поэтому лечение данной группы пациентов необходимо производить с особой осторожностью, назначая минимально активные и эффективные дозировки. Также необходим тщательный контроль работы почек

Показания

Применение препарата симло необходимо в случаях, когда возникает наследственная форма гиперхолестеринемии. Помимо этого он активно используется при различных инфарктах миокарда.

Компоненты препарата могут быть использованы и при комбинированной в форме повышенного уровня холестерина в крови.

Назначается симло при возникновении риска развития ишемической болезни сердца. При этом, препарат не используется как основное лечебное средство, лишь как второстепенный препарат.

Особое внимание, при использовании препарата выделяют лицам имеющим риск возникновения различных заболеваний коронарных артерий. Заметку! Основная причина возникновения заболевания коронарных артерий – высокий уровень холестерина. Применение препарата способствует уменьшению вероятность развития болезни.

Заметку! Основная причина возникновения заболевания коронарных артерий – высокий уровень холестерина. Применение препарата способствует уменьшению вероятность развития болезни.

Параметры для мониторинга состояния мелких домашних животных

эффективность;
побочные эффекты (при длительной терапии или если имеются какие-либо нарушения в работе почек или печени, следует проводить тесты, определяющие функциональное состояние печени и почек).

Информация для владельца имипенем, потенцированный циластатином, следует назначать только в условиях стационарного лечения. Владельцев необходимо проинформировать о стоимости этого препарата. Препараты имипинема следует применять строго согласно иснтрукции по применению.

Медицинские препараты (можно приобрести в человеческих аптеках):

Имипенем торговое название. Имипенем/циластатин инъекционный для парентерального в/в введения: 250 мг: 250 мг (с 10 мг натрия бикарбоната); 500 мг: 500 мг (с 20 мг натрий бикарбоната), Primaxin7. V. (Merck); (Rx).
Имипенем/циластатин, суспензия для в/м введения: 500 мг: 500 мг; 750 мг:750 мг; Primaxin I. V. (торговое название, Merck); (Rx).

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

В данной работе в модифицировании SR-части карбапенемов мы запланировали использовать
некоторые производные меркаптоуксусной кислоты и фурил-2-метилтиола. Этот выбор обусловлен
желанием заменить применяемые в синтезе карбапенемов из фосфоната (I) тиолы общей формулы HSR, включающие пирролидиновый цикл и получаемые в большинстве
методик из дорогостоящего транс-4-гидрокси-L-пролина [], на легкодоступные аналоги, в частности, на амиды меркаптоуксусной кислоты.

В синтезе производных карбапенемов наиболее практичны подходы, исходящие из ключевого
(4‑нитробензил)-(4R)-3—6-[(1R)-1-гидроксиэтил]-4-метил-7-оксо-1-азабициклогепт-2-ен-2-карбоксилата (I) , в котором дифенилфосфатная группа в мягких условиях замещается на RS-остаток тиолов
RSH с образованием карбапенемов общей формулы (IIа), которые последующим гидрогенолизом превращают в целевые карбапенемы (IIb) . По этой схеме, вводя в реакцию с фосфонатом (I) соответствующие, не содержащие пирролидиновый цикл тиолы (VII)–(X), мы синтезировали ряд защищенных по карбоксильной группе карбапенемов (IIIа)–(VIа) и после снятия pNb-эфирных групп – целевые карбапенемы (IIIб)–(VIб) (схема 1).

После очистки колоночной хроматографией на SiO₂ pNb-эфиры (IIIа)–(VIа) были выделены с чистотой ~98%. При выделении кислот (IIIб)–(VIб) рекомендуемая обращено-фазовая хроматография на Diaion HP-20 [] с последующей липофилизацией не применялась из-за неоправданно высоких потерь целевых
соединений в ходе очистки. Применяемая нами методика проста и включает фильтрацию
гидрогенолизата от катализатора, упаривание раствора и вакуумирование остатка для
удаления побочного нитротолуола. В этом случае чистота полученных образцов (IIIб)–(VIб) согласно данным 1H- и 13С-ЯМР была на уровне ~95%.

На антибактериальную активность in vitro наряду с кислотами (IIIб)–(VIб) мы тестировали также pNb-эфиры (IIIа)–(VIа) и известные препараты Меропенем и Цилапенем (табл. 1). Как видно из данных табл.
1, в ряду pNb-эфиров (IIIа)–(VIа) в отношении четырех испытанных микроорганизмов (Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Streptococcus oralis и Candida albicans) наиболее активны соединения (IVа) и (Vа), содержащие в заместителе SR соответственно фрагменты фурана и пиперазина, соответственно.
Кислоты (IIIб)–(VIб) по активности в целом уступают pNb-эфирам, но более активны в сравнении с Меропенемом
и Цилапенемом.

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ БИОЛОГИЧЕСКАЯ ЧАСТЬ

Для исследования антибактериальной активности синтезированных карбапенемов в качестве
тестовых микроорганизмов использовали музейные штаммы: Escherichia coli № 25922, Pseudomonas aeruginosa (штамм SS14 KC 866140), Candida albicans № 24433 (все из коллекции Клиники БГМУ), Streptococcus oralis № 27417 (из коллекции кафедры фундаментальной и прикладной микробиологии БГМУ).

Для приготовления рабочих растворов из основных растворов тестируемых соединений в
диметилсульфоксиде (DMSO) использовали бульон Мюллера-Хинтона (“HiMedia”, Индия).
В качестве препаратов сравнения использовали известные антибиотики Меропенем (Meropenum
(род. Meropeni) (Джепак Интернейшенл, Индия) и Цилапенем (Imipenemum + Cilastatinum (род. Imipenemi + + Cilastatini)) (РУП Белмедпрепараты, Республика Беларусь).

Минимальные подавляющие концентрации (МПК) химических соединений (IIIa)–(VIa),(IIIб)–(VIб) оценивали референтным методом микроразведений в бульоне. Для этого готовили основные
растворы из имевшихся навесок тестируемых веществ в стерильных флаконах, которые растворяли
в 1 мл DMSO с вычислением процентной концентрации (C, %). Затем готовили рабочие растворы путем двукратных последовательных разведений
основных растворов (выше и ниже концентрации 1 мкг/мл) в бульоне Мюллера-Хинтона.
Готовые разведения использовали в день их приготовления.

Инокулюм готовили путем суспендирования в физиологическом растворе 4–5 морфологически
однородных колоний, выросших на чистой неселективной твердой питательной среде, инкубированной
при 37°С в течение 18–24 ч, и доводили суспензию до мутности, эквивалентной 0.5 стандарта
МакФарланд (1.5 × 108 КОЕ/мл). Далее приготовленный инокулюм разводили в бульоне Мюллера-Хинтона (разведение
1 : 100), чтобы получить требуемую плотность микробной культуры 5 × 106 КОЕ/мл. Планшеты инокулировались в течение не более 30 мин после приготовления инокулюма
для сохранения необходимого числа жизнеспособных клеток.

Для проведения эксперимента по определению минимальных подавляющих концентраций использовали
планшеты, в отдельные лунки которых последовательно добавляли по 50 мкл каждого из
рабочих растворов тестируемых химических соединений. К каждой лунке, содержащей 50
мкл раствора химического соединения, разведенного в бульоне, добавляли 50 мкл бактериальной
суспензии (5 × 106 КОЕ/мл).

Для контроля роста всех проверяемых штаммов микроорганизмов обязательно ставили положительный
контрольный образец (ПКО) в лунке, содержащей 50 мкл бульона и инокулюма соответствующего
микроорганизма без химического соединения. Аналогично, лунка, содержащая 50 мкл питательного
бульона без химического соединения, была использована как неинокулированная лунка
отрицательного контрольного образца (ОКО).

Планшеты для микроразведений перед инкубацией заклеивали прозрачной пленкой и запечатывали
в полиэтиленовые пакеты для предотвращения высушивания. Планшеты инкубировали в термостате
в течение 16–20 часов при 37°С. Для более равномерного нагревания планшеты были сложены
в стопки не больше чем по пять штук.

Диапазоны микроразведений для определения МПК исследуемых соединений составили от
0.5 до 0.015625 мкг/мл.